Mifluidic循环肿瘤细胞科研检测平台

1、研究背景

世界卫生组织发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，中国新发癌症和癌症死亡人数位居全球第一。2020年全球新发癌症病例1929万例，其中中国新发癌症457万人，占全球23.7%，人数远超世界其他国家。2020年全球癌症死亡996万人，其中中国癌症死亡人数300万人，占癌症死亡总人数30%，主要由于中国癌症病人人数多，癌症死亡人数位居世界第一。

循环肿瘤细胞（Circulating Tumor cells,CTCs）是痕量存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，大部分CTCs在进入外周血后发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶，增加肿瘤患者死亡风险。大量研究表明，CTCs以不同形态存在于外周血中，既有单个存在（单细胞CTCs）、也有聚集成团（CTM, Circulating tumor microemboil）。肿瘤细胞在进入外周血循环的过程中会发生上皮-间质转变（EMT, epithelial mesenchymal transition），故CTCs存在不同细胞类型，包括上皮细胞表型、间质细胞表型和上皮细胞与间质细胞混合表型等。其中，间质细胞表型CTCs具有更强的转移潜能。目前，CTCs的临床价值已被广泛肯定。

CTC临床应用价值包括：

（1）对于影像学不确定良恶性的患者辅助诊断

对于影像学显示有结节等其中不确定良恶性的情况，循环肿瘤细胞可以作为一种辅助诊断的手段。多个研究表明，癌症早期阶段患者的外周血中就可以检测到CTC。CTC作为完整的细胞，比单一的标志物（血清蛋白、游离DNA）具有更高的证据等级，是一种特异性较好的辅助诊断方法，也可以结合其他血清标志物综合判断，提升灵敏度。

（2）术前新辅助治疗指导

术前新辅助治疗存在一部分无法获益的患者，以及治疗后出现疾病进展而无法手术的患者。通过在治疗中针对进展类高危的CTC亚群检测，可以及时评估术前新辅助治疗的疗效，对于出现进展风险的患者，及时更改治疗方案或者停止新辅助治疗。

（3）术后辅助治疗指导

在根治术患者手术后，部分类型患者的术后辅助治疗获益尚未明确。CTC作为术后体内残留的肿瘤细胞，可以筛选出需要术后辅助治疗的患者，以及避免过度治疗。在未转移患者手术后的辅助治疗中，转移类高危亚群CTC的检测可以及时评估治疗效果，对于提示进展或者转移风险高的患者，及时更改治疗方案。

（4）术后长期复发转移监测

对于完成术后辅助治疗的患者，通过长期对其CTC检测，及时发现近端远端复发的风险，提供更早的干预应对窗口期。

（5）单抗、ADC药物用药指导

单抗类药物与ADC药物的作用靶点为肿瘤细胞表面蛋白，用药前通常需要对组织进行蛋白检测。对于无法穿刺的患者，可以通过CTC的表面蛋白检测来辅助评估；对于正在用药的患者，可以通过CTC表面蛋白检测评估其靶点变化。

图1 CTC检测的临床应用

2、研究目的

评估循环肿瘤细胞检测对晚期非小细胞肺癌、转移性乳腺癌、晚期结直肠癌、晚期肝癌预后预测能力。以无进展生存期（PFS）为观察终点进行分析。

3、产品简介

武汉简米智控科技有限公司的循环肿瘤细胞检测平台，基于微孔膜捕获和免疫荧光染色技术，分离富集和鉴定CTC，检测原理为：微孔膜孔径介于CTC与血细胞尺寸之间，结合流体控制技术，在一定范围的负压及流速条件下过滤掉绝大多数血细胞及白细胞，同时俘获血液样本中的CTC。在微孔膜完成捕获并富集后，添加荧光标记的特异性抗体以识别及计数CTC，最后通过荧光显微镜观察，即鉴定出CTC细胞。

1）检测试剂：

免疫荧光检测：稀释液、PBS缓冲液、DAPI染色液、CD45抗体试剂、CK抗体试剂、过滤采集器、固定液、抗体稀释液。

可选试剂：（原位杂交检测：稀释液、SSC缓冲液、DAPI染色液、CEP8探针、CD45抗体试剂。）

2）检测设备：荧光显微镜

①参数要求：

②适用设备型号：倒置荧光显微镜LF200、倒置荧光显微镜MF53-N、Axio Observer A1荧光倒置显微镜、FV3000共聚焦显微镜等。

3）检测流程（整个操作过程仅需2-3h）

图2 CTC检测流程图

4）产品优势

①高通量与高效富集：使用新一代纳米滤膜（半导体光刻膜）技术，通量高（20万孔）富集效率好，荧光背景低；

②高截流率与血细胞去除率：CTC截流率高，大于90%；血细胞去除率高，大于99.999%；

③操作简便快捷：操作简单，无血样前处理，无需制备涂片，整个流程小于3小时；

④全面鉴定能力：可收集鉴定全亚型CTC，包括上皮型（CK）、间质（VIM）、混合型、CTM（肿瘤细胞簇）；

⑤成本效益高：设备便宜，配套设备简单。

⑥设备要求简单：无需大型的检测设备，可适用于任何大中小科研实验室；可使用实验室现有荧光显微镜（≥3通道）进行检测，无需采购新的检测设备；配套样本处理设备包括移液枪、细胞分选仪等常规实验设备，一般无需采购。

5）结果展示：

I:免疫荧光：（DAPI+PanCK+CD45）

II:原位杂交：（DAPI+CEP8+CD45）

6）过滤设备、耗材与试剂展示

过滤设备：

耗材（内置微孔膜）：

检测试剂盒

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